1 前言

目前，阿维菌素作为牛常用的抗寄生虫药物，容易造成牛组织中药物残留超标，且会污染牛奶。因此，监控该类有无在畜禽类可食性组织及产品中的残留显得非常重要。采用海能全自动固相萃取仪-高效液相色谱法进行检测牛奶中阿维菌素农药残留，有效的缩短样品中目标物的固相净化所需要的时间，提高了工作效率，也节约了人力；且能精准的控制上样、淋洗、洗脱等溶剂流速，提高了样品目标物的回收率。

2 仪器与试剂

2.1仪器

SPE400全自动机械臂固相萃取仪；HN200多功能氮吹仪；高效液相色谱仪（配荧光检测器）；分析天平；高速分散均质机；涡动混合仪；离心机；其他常规玻璃仪器；滤膜（有机相，0.45μm）。

 

SPE400全自动机械臂固相萃取仪

2.2试剂及耗材

实验用水应符合GB/T6682中一级用水的规格，使用试剂除特殊说明外，均为分析纯。

乙腈（色谱纯）；甲醇（色谱纯）；三氟乙酸酐；三乙胺；异辛烷；N-甲基咪唑；阿维菌素标准品：含量≥98%。

固相萃取柱：C18，500mg/6ml。

衍生化试剂A液：取N-甲基咪唑1mL、乙腈1mL，混匀，现配现用。

衍生化试剂B液：取三氟乙酸酐1mL、乙腈2mL，混匀，现配现用。

洗涤液：取乙腈30mL、水70mL和三乙胺20μL，混匀。

3 实验方法

3.1取样

取适量新鲜的牛奶，用高速分散均质机将样品混合均匀。

3.2提取

称取样品5g于50mL离心管中，加乙腈8mL，涡动1min，4500r/min离心10min，取上清液。残渣中加乙腈8mL，重复提取一次，合并两次上清液，加水20mL、三乙胺50μL，混匀，备用。

3.3固相萃取柱净化（C18柱）

表1 固相净化条件

3.4浓缩及衍生化

用氮吹仪吹至近干，备用。于备用管中依次加入衍生化试剂A液100μL、衍生试剂B液150μL，密闭，涡动10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，涡动10s，于室温密闭反应30min，加甲醇650μL混匀。过滤，供高效液相色谱法测定。

3.5色谱测定条件

色谱柱：C18，粒径5μm，柱长250mm，内径4.6mm；

流速：1.0mL/min；

激发波长：365nm；   发射波长：475nm；

柱温：30℃；

进样体积：20μL。

流动相：乙腈：水=（90+10，V/V），

3.6标准曲线的制备

精密量取10μg/mL阿维菌素类药物混合标准贮备液适量，用乙腈稀释，配制成浓度为2、5、10、50、1000ng/mL的系列标准溶液，各取1.0mL于5mL试管中，于60℃水浴氮气吹干，依次加入衍生化试剂A液100μL、衍生试剂B液150μL，密闭，涡动10s，依次加冰醋酸50μL和三乙胺各50μL，涡动10s，于室温密闭反应30min，加甲醇650μL混匀，供高效液相色谱测定。以测得峰面积为纵坐标，对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线。求出回归方程和相关系数。

3.7测定

取试样及不添加样品的空白溶液，按外标法，以峰面积计算，根据回归方程，得出试样中阿维菌素含量。

4 实验结果

4.1结果

4.2结论

采用SPE400全自动机械臂固相萃取仪可以快速对样品提取液进行净化和富集，可做到无人看守、批量处理，省去实验员繁琐的加液取液等人工操作，方便快捷。采用SPE400全自动机械臂固相萃取仪对样品提取液可以精准的控制进样、加液等流速，有利于固相小柱进行萃取分离，从而实现较好的样品检测重复性。         

参考文献

[1] GB 29696-2013 食品安全国家标准 牛奶中阿维菌素类药物多残留的测定[S].