紫外可见分光光度法检测 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留
1 前言
在蔬菜生长过程中，有机磷和氨基甲酸酯类农药对蔬菜上的多种害虫均有较好的防效作用。但是，残留在蔬菜或水果中的农药进入到有机体内具有积累效果，会对生物体内胆碱酯酶具有抑制作用，使其失去分解乙酰胆碱的能力，造成乙酰胆碱积累，引起神经功能紊乱，从而导致肌体的损害。现在比较成熟的理化检测方法一般步骤复杂，所用时间长，且仪器昂贵。分光光度仪通过农药对酶的抑制可检测出农药残留是否在合格范围内，具有简单、快速、成本低等特点。
2 仪器与试剂
2.1 仪器
Hanon i2可见分光光度计，天平。
2.2 试剂
pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。
显色剂：分别取160mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。
底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用。保存期不超过两周。
乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶剂溶解，3min的吸光度变化值ΔA0值应控制在0.3以上。摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超过四天。
可选用由以上试剂制备的试剂盒。乙酰胆碱酯酶的ΔA0值应控制在0.3以上。
3 实验方法
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关，正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量有机磷和氨基甲酸脂类农药存在。
3.1样品制备
选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片。
取样品1g左右，放入烧杯或提取瓶中，加入5mL的pH8.0缓冲溶液，振荡1min~2min，倒出提取液，静置3min~5min，待用。
3.2 对照品测试
先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入0.15mL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃左右的温度放置15min以上（每批样品的控制时间应一致）。加入0.1mL底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应3min的吸光度变化值ΔA0。
3.3样品测试
先于试管中加入2.5mL样品提取液，其他操作与对照溶液测试相同，记录反应结果。
4 结果与讨论
4.1 实验结果
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。
4.2 结论
当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检测2次以上。
对阳性结果的样品，可使用其他方法进一步确定具体农药品种和含量。
通过实验测得的几种蔬菜中的酶抑制率均＜50%，在合格范围内，此方法操作简单，节省了实验成本。
参考文献
[1] GB/T 5009.199 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测[S].
注意事项
对照溶液和样品加入酶液和显色剂后放置的时间要一致，保证结果的准确性。加入0.1mL底物后尽量快速摇匀放入仪器中检测吸光度变化值。
