证券简称:海能仪器
证券代码:430476
       
       

液相色谱法测定食品中的甜菊糖苷

1  前言

甜菊糖又称甜菊苷,它是从菊科植物甜叶菊的叶子中提取出来的一种糖苷。甜叶菊原产于巴拉圭和巴西,现在中国、新加坡、马来西亚等国家也有种植,其甜味成分由甜菊苷及甜菊A苷、B苷、C苷、D苷和E苷组成。

甜菊糖甙(俗称甜菊糖、甜菊糖苷)是一种从菊科草本植物甜叶菊(或称甜菊叶)中精提的新型天然甜味剂,而南美洲使用甜叶菊作为药草和代糖已经有几百年历史。国际甜味剂行业的资料显示,甜菊糖甙已在亚洲、北美、南美洲和欧盟各国广泛应用于食品、饮料、调味料的生产中。中国是全球最主要甜菊糖甙生产国。

甜菊糖甙甜度为蔗糖的250~450倍,带有轻微涩味,甜菊A苷带有明显的苦味及一定程度的涩味和薄荷醇味,味觉特性要比甜菊双糖苷A差些,适度可口,纯品后味较少,是最接近砂糖的天然甜味剂,甜菊糖苷甜度高,且持续时间长,无褐变,极利于保持饮料、食品的本色。

针对目前国内食品行业(例如饮料、糕点、糖果)中添加甜菊糖的情况,海能仪器推出了食品中甜菊糖苷的高效液相色谱测定方法

2  实验部分

2.1 基本原理

样品中甜菊糖苷经溶剂提取净化后,供高效液相色谱仪(紫外检测器)检测,外标法定量。

2.2 试剂与材料

除另有说明外,所用试剂均为分析纯

乙腈(色谱纯)。

磷酸。

石油醚。

0.002 mol/L 磷酸溶液:精密称取0.196 g 磷酸于1000 mL 容量瓶中,加水定容至刻度。

甜菊糖苷( Stevioside C38H60O18)标准品:含量>99.7 % CAS 57817-89-7

甜菊糖苷标准溶液:精密称取甜菊糖苷标准品10 mg 10 mL 容量瓶中,加1 ml 乙腈,溶解后加水定容至刻度,得甜菊糖苷浓度为1 mg/mL 的标准溶液。

甜菊糖苷标准系列溶液的制备:精密吸取甜菊糖苷标准溶液0.05 mL0.1 mL0.2 mL0.5 mL1.0mL 10 mL 容量瓶中,加水稀释并定容至刻度,得浓度为5.0 μg/mL10.0 μg/mL20.0 μg/mL50.0 μg/mL100.0 μg/mL 的甜菊糖苷的系列标准溶液。取此系列标准溶液适量,使用0.22 nm 有机滤膜过滤后待测。

2.3 仪器与设备

海能LC7000液相色谱仪:配紫外检测器。

电子分析天平:感量1 mg

混匀器。

离心机,转速大于5000 r/min

滤膜:0.22 μm 有机滤膜。

2.4 样品的制备

液体样品:

称取5.0 g 试料,于10 mL 烧杯中,精确至0.01 g,加流动相适量,混匀后,移入50mL 容量瓶中,加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后,过0.22 μm 有机滤膜待测。

水溶性固体样品:

取有代表性的混合均匀试料2.5 g,于10 mL 烧杯中,精确至0.01 g,加流动相适量,混匀后,移入50 mL 容量瓶中,加流动相定容至刻度。充分振荡混匀后,过0.22 μm 有机滤膜待测。

水不溶性试料:

取有代表性的混合均匀试料2.5 g,于10 mL 烧杯中,精确至0.01 g,移入50 mL离心管中,加15 ml 石油醚涡旋振荡5min,在5000 r/min 下离心10 min,将上清液弃去,残渣中再加15 mL×3 石油醚,重复以上步骤3 次,弃去上清液,氮气吹干残渣。残渣中加1 g 无水硫酸钠和8 m0.22μm有机滤膜乙腈,涡旋振荡5 min,在5000 r/min 下离心10 min,上清液置于25 mL 比色管中,重复提取1 次,氮气吹干后,残渣用流动相全量转移到50 mL 容量瓶中并定容至刻度。充分混匀后过0.22 μm有机滤膜待测。

2.5 分析步骤

色谱条件

色谱柱:C18柱(250 mm×4.6 mm5 μm

流动相:0.002 mol/L磷酸溶液+乙腈=70+30

流速:1.0 mL/min

柱温:30 ℃:

波长:210 nm

进样量:10μL

 

3  结果与分析

3.1 测定

精密吸取试料和标准品溶液,按规定色谱条件分别进样10 μL,以甜菊糖苷保留时间定性,外标法峰面积定量。标准色谱图见下图。

式中:

X试料中甜菊糖苷含量,mg/kg

C从标准曲线中算出试液中甜菊糖苷的浓度,μg/mL

m试料质量或体积,g ml

V试料定容体积,mL

3.2 重复性

见下图

 


图中可见,甜菊糖苷连续5针进样,峰面积重复性RSD%0.004,保留时间重复性良好,完全满足方法要求。

3.3 线性范围和检出限

本方法的线性范围为5.0 μg/mL100.0 μg/mL。检出限为4.00 mg/kg


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