凯氏定氮仪测定乳酸菌素中蛋白质含量
1 前言
乳酸菌素是由乳酸菌产生的一种具有活性的多肽或蛋白质。大部分细菌素对近缘关系的细菌有抑制作用,少数细菌素抑菌谱很广。乳酸菌除了本身对人体有健胃、整肠等保健功能外,其代谢过程中会产生许多有益物质。
2 实验部分
2.1原理
有机态氮在浓硫酸和催化剂的共同作用下,转化为氨态氮。加碱蒸馏后,用硼酸吸收后,再以硫酸标准滴定液进行滴定。
2.2 仪器与试剂、器具
2.2.1 K1100F全自动凯氏定氮仪(济南海能仪器股份有限公司)。
2.2.2 SH420F石墨消解仪(济南海能仪器股份有限公司)。
2.2.3 硫酸 分析纯,c(HCL)=0.1mol/L,标准滴定液。
2.2.4 硼酸 分析纯,质量分数2%。
2.2.5 氢氧化钠 分析纯,质量分数40%。
2.2.6 溴甲酚绿-甲基红混合指示剂 将溴甲酚绿乙醇溶液(1g/L)与甲基红乙醇溶液(1g/L)按5:1体积比临时混合摇匀备用。
2.2.7 催化剂:硫酸钠和硫酸铜以10:1的比例混合备用
2.2.8 50ml量筒
2.2.9 称量瓶
2.3 实验部分
2.3.1取样:取0.6g左右的样品,用无屑称量纸包住投入消化管中,加混合催化剂1g,再沿瓶壁滴加硫酸8.0ml.
2.3.2消解:消解:在凯氏烧瓶口放一小漏斗并使凯氏烧瓶呈45°斜置,用直火缓缓加热。使溶液的温度保持在沸点以下,等泡沸停止,强热至沸腾,等溶液成澄明的绿色后,除另有规定外,继续加热30分钟,放冷。
2.3.3稀释:将溶液用45ml水转移至50ml容量瓶中,加水定容。精密量取2ml加入消化管中。
2.3.4 待消化管内溶液冷却至室温后,将消化管放置于定氮仪上。定氮仪设置程序如下:
稀释水:10ml
硼酸: 25ml
碱: 10ml
蒸馏时间:5min
2.3.5 仪器自动滴定并给出计算结果。
3 结果与讨论
式中:M-标准酸摩尔浓度(mol/L) (一般使用0.05mol/L)
W-样品质量(g)
V0-空白样滴定标准酸消耗量(mL)
V-样品滴定标准酸消耗量(mL),精确到小数点后四位
6.25是蛋白质系数
注意事项:
1.由于样品消解完要进行定容,要注意将样品转移干净,不要有残留。
2.消解过程中,注意不要将硫酸烧干。