海能技术
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聚焦3.15:养殖海参中敌敌畏的测定方法


今年的3.15晚会“迟到”了,但没有缺席。昨晚,推迟了4个月的3.15晚会终于来了,精装修房施工质量难保证、“汉堡王”使用过期食材、“趣头条”推送非法广告、养殖海参敌敌畏成箱放……今年被点名的又不少。

 

不看不知道,原来海参养殖水这么深,此次3.15晚会主要曝出了有关海参养殖的5大“黑幕”:

● 大量使用敌敌畏清池

● 排回大海污染环境
● 使用抗生素兽药原粉防病
● 南方参冒充北方参
● 麦芽糊精腌泡增重

 

看上去全产业链没有一处能让人放心。这些行为不但严重违反了相关法规,还给环境造成了极大的危害。

关于海参养殖中大量使用敌敌畏这一现象,显然是违法的。敌敌畏属于农药,按照我国的农药管理条例,不能盲目扩大农药的使用范围。

 

敌敌畏是什么?

敌敌畏(Dichlorvos)是一种著名的有机磷类的农药。这类农药的特点是便宜且高效,我国有机磷类农药的产量居世界第二。

 

毒性如何?

敌敌畏相比于其他的有机磷类农药,急性毒性算是比较大的了,也是很多其他有机磷类农药的代谢产物,属于国家明令禁止添加的非食用物质,长期暴露会有致癌性和神经毒性,所以能少接触尽量少接触。

为了保障人民的身体健康,加强对食品安全的监管,我国于2016年提出敌敌畏的检测方法:GB 23200.94-2016 食品安全国家标准 动物源性食品中敌百虫、敌敌畏、蝇毒磷残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法。

仪器与试剂

1、仪器

高效液相色谱-质谱/质谱仪,超声波清洗仪,分析天平、旋涡混匀器、旋转蒸发仪、离心机、均质器。       

2、试剂

乙腈,甲醇、乙酸乙酯、二氯甲烷、环己烷、硫酸钠、乙酸铵、符合GB/T6682的一级水、敌敌畏标准品:CAS 62-73-7,纯度≥97.6%。

溶液配制:50mmol/L乙酸铵溶液:称取0.385g乙酸铵溶于1000mL 水中。

敌敌畏标准储备液:准确称取适量敌敌畏标准品,用甲醇配制成浓度为100μg/mL浓度的混合标准储备液。此溶液在0°C~4°C冰箱中避光保存,可使用3个月。

空白样品提取液:用不含敌敌畏残留的样品,按照3.2制备空白样品提取液。

敌敌畏标准工作溶液:根据需要用空白样品提取液将标准储备液稀释成50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL的混合标准工作溶液。置于0°C~4°C冰箱中避光保存,可使用3天。

实验方法

1、干海参的复水

1.1预浸泡

2只-3只干海参,称重约10g(精确至0.01g),置于1000mL烧杯中,倒入水(水量约为海参质量的50倍,并应浸没参体),再盖上表面皿,室温浸泡24h。

1.2清洗

在浸泡液中剖开海参体,清洗海参附着的泥砂,去除嘴部石灰质后,切成宽约5mm条状;将海参体,泥砂及嘴部石灰质均保留在原浸泡液中。

1.3水煮

将经1.2处理的试样及浸泡液于原烧杯中,盖上表面皿,大火煮沸,然后调至小火,保持沸腾继续煮30min,晾至室温后,置于0℃~10℃冰箱中,放置20h。煮沸及浸泡过程中应保持水量浸没参体。

1.4试样

1.3处理的浸出液及海参体全部倒入1000mL量筒中,定容至600mL,混匀。取出海参放入烧杯中,加入600mL水,按1.3的方法再水煮一次,将在冰箱放置后的海参取出,用滤纸吸去表面水分,绞碎用于药物残留的测定。

2、提取与净化

2.1 准确称取5g均匀试样(精确到0.01g)于50mL具塞试管中,加入5g无水硫酸钠混匀,再加入15mL二氯甲烷,用均质器(10000r/min)均质2min,4000r/min离心3min,将有机相转移至100 mL梨形蒸馏瓶中,残渣再用2×10mL二氯甲烷均质提取二次。

2.2 离心合并有机相,于40℃旋转蒸发至2mL,将样液转移至5mL刻度试管中,并用少量二氯甲烷洗涤梨形蒸馏瓶,合并洗涤液到刻度试管中,室温通氮浓缩至干。定量加入1.0mL乙腈溶解残渣,加入2mL环己烷旋涡混匀2min后,2500r/min离心3min,将下层乙腈相过0.45μm微孔滤膜后,供液相色谱-质谱/质谱仪测定。

3、色谱参考条件

3.1 色谱柱:柱填料为十八烷基硅烷键合相的色谱柱,4.6×150mm,5μm或相当者;

3.2 流动相:甲醇:50mmol/L乙酸铵;

3.3 梯度洗脱程序:

 

3.4 流速:0.50mL/min或根据仪器条件优化;

3.5 柱温:40℃;

3.6 进样量:10μL;

3.7 离子源:电喷雾离子源;

3.8 扫描方式:正离子;

3.9 检测方式:多反应监测(MRM);

3.10 质谱参考条件

监测离子对及电压参数:

a) 窗帘气(CUR):15.00Pa;

b) 雾化气(GS1):40.00Pa;

c) 辅助加热气(GS2):45.00L/min;

d) 碰撞气(CAD):7.00Pa;

e) 离子源喷雾器电压(IS):5000.00V;

f) 喷雾针温度:(TEM):550.00℃;

g) 定性离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞能量、碰撞室出口电压见下表。

 

4、测试

分别取10μL敌敌畏标准工作液和试样溶液,在高效液相色谱-质谱/质谱仪上测定敌敌畏的峰面积,用外标法计算敌敌畏残留量。

 

悟空K2025高效液相色谱仪

 

可靠

强化可靠性设计理念,采用全球高品质核心元器件,历经权威机构可靠性验证,确保系统长期稳定运行;

精准

独特的送液与进样技术,结合高灵敏度检测器与强大的数据处理软件,确保分析结果精密准确;

友好

简洁易用的Wookinglab界面,结合多项人性化的细节设计,使仪器的操控更加便捷高效;

合规

Wookinglab采用数据库存储模式,支持多级权限管理,具备完善的审计追踪功能,充分满足FDA 21 CFR Part 11要求。